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4.2 超高速離心法： |
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a. 沉降係數 |
蛋白質分子在離心時，其 分子量、分子密度、組成、形狀 等，均會影響其沉降速率，沉降係數 即用來描述此沉降性質； 其單位為 S (Svedberg unit)，每一種蛋白質的沉降係數與其分子密度或分子量成正比。 不同沉降係數的蛋白質，可利用超高速離心法，在密度梯度中作分離。 |
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b. 密度梯度作法 |
一般有三種製作梯度的方式： (1) 在樣本溶液中直接溶入 CsCl，經離心後自動形成梯度。 (2) 使用梯度製造器，在離心管內預先拉好 甘油 或 蔗糖 的梯度，加樣本後離心。 (3) 在一極為熟悉的離心操作中，以上亦可以 階段式 (stepwise) 梯度進行。 |
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c. 兩種離心方式 |
上述 (1) 及 (2) 二者，分屬兩類不同的離心形式，列表並以圖解說明如下︰ |
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表 4.1 兩種超高速離心方式的比較： |
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圖 4.1 高速離心與兩種超高速離心法的比較 |
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d. 離心陀種類 |
使用不同離心陀，有不同離心方式及效果。 (1) 角型 (angle rotor)： 典型的離心方式，多用在大量製備時。 (2) 懸籃式 (swing bucket rotor)： 傳統用在密度梯度離心。 (3) 垂直 (vertical rotor)： 取代懸籃式，可大大縮短離心時間。 (4) 區帶 (zonal rotor)： 在梯度離心後，可直接分劃出各區帶樣本。 (5) 連續式 (continuous rotor)： 可一邊離心，一邊加入或取出樣本。 |
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e. 操作注意 |
超高速離心因為轉速極高，離心陀構造也較複雜，操作上要非常小心，完全純熟後才進行實驗，新手要有熟練者在旁指導。 操作時特別注意下列各點： (1) 離心管的平衡要準確，封管要確實，否則液体可能被抽乾。 (2) 使用懸籃式離心陀，在懸掛離心管時，要注意有沒有掛妥。 (3) 轉速切勿超過所使用離心陀的最高限，老舊者的最高限還要打折。 (4) 離心後要清理離心陀，可用水沖乾淨後晾乾；尤其使用 CsCl 者，非洗不可。 (5) 時常檢查離心艙及離心陀，注意有無腐蝕及傷痕，有者立刻請廠商檢修。 |
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