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2 蛋白質抽取 |
3 色層分析法 |
4 其它純化方法 |
5 純化策略 |
1.1 儀 器 1.2 小型器具及消耗品 1.3 藥 品 1.4 個人用品 |
1 酵素純化實驗室︰ |
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實驗室的設備與經營管理,在有形或無形中,影響實驗的品質或其成敗甚鉅。 |
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a. 基本設備 |
小型儀器可歸納成 電泳 與 層析 兩大類,大型儀器主要有 離心機 及 光度計 兩類。 (1) 基本設備有: 純水製造系統、製冰機、高速冷凍離心機 (20,000 rpm)、微量離心機、電泳及轉印系統 (包含供電器)、ELISA 光度計,及各種層析管柱系統 (包含分劃收集器)。其中電泳與層析包含很多獨立的小型器具,使用上較複雜。 (2) 個人電腦及周邊: 今日的實驗室已經離不開電腦,不管是 套裝軟體 或者網路的應用,都不可缺乏。 (3) 進一步的設備有: 超高速離心機、冷凍乾燥機、超微膜過濾系統、雙向電泳、等電焦集電泳系統、分光光度計 (UV及可見光)、HPLC 或 FPLC。 (4) 特別的設備有: 液相閃爍計數器、原子吸收光譜分析儀、毛細管電泳,其他貴重儀器如:蛋白質定序儀、質譜儀、影像分析系統、分子結構電腦工作站。 |
◇ 要小心管理所有儀器
■ 套裝軟體: Reference Manager, SigmaPlot, Visio, CorelDRAW, PowerPoint, 排程軟體 |
b. 儀器管理及使用 |
(1) 每件儀器應指定專人管理,負責保管零附件、說明書,並做初級保養。儀器若不能正常使用,並發揮其最大服務功能,則其設置純為枉然。 (2) 光學或精密儀器,應放在有除溼機的密閉室;發熱的器具應當集中放在通風良好處,並且 注意電容量是否足夠,以免過荷造成災害。 (3) 使用儀器前,要先熟悉操作法;有問題必請教管理人,使用前後應登記 (登入、登出),有任何毛病要立刻反映,不可隱瞞。 |
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c. 冰箱 |
(1) 應妥善規劃貯位,詳細表列內藏物品;藥品分類用小盒裝在一起 (貨櫃化),勿零散堆積,以免臨時翻找費時,導致冰櫃失溫。 (2) 零下的冷凍櫃,勿使用無霜冰箱;因為定時除霜裝置會造成冰箱內溫度上升,藥品可能會因反復『凍結-解凍』而失去活性;若不得已使用自動除霜冰箱,可裝在普利龍盒子內,使藥品傷害降至最低,也可減輕停電所造成的傷害。貴重的藥品要小心放在冰箱內部,不要放在冰箱門扇所附的架子,以免冰箱開門時溫度上升。 (3) 時時注意冰箱門一定要關好,尤其是零度以下的冰箱,若因門不閉緊而造成回溫,對藥品及冰箱都是大災難。 |
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a. 常用小型器具 |
均質機或果汁機、磨粉機、pH 測定計、天平、水浴、冰筒、自動吸管 (20, 200, 1000 mL 三種)、磁鐵攪拌機、試管振盪器、試管架、滴管。 |
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b. 公用器具 |
應集中放在定位,用畢立刻清理歸位! 自動吸管應經常校正,可吸取純水在天平秤之,每 1.0 mL 水應秤得 1.0 gm,若誤差在 3% 以上,立即送修。 |
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c. 常用消耗品 |
自動吸管頭 (黃色及藍色)、微量離心管 (microfuge tube)、大小離心管、濾紙、紗布、棉花、手套、擦拭紙、透析袋、保鮮膜、鋁泊紙及玻璃試管等。 |
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a. 貯存溫度 |
(1) 每種藥品有其最適當的貯存溫度,切要遵守; 一般分為: 室溫、4℃及 -20℃三種,又可依其為固体、液体或高純度者,分別置放。 (2) 除了常用的大宗藥品 (如 NaCl),較精密或不穩定的試劑 (如大部分酵素) 最好不要大量屯積,因為貯藏時間太久無法控制其品質。 |
■ 試劑說明書 |
b. 分裝凍藏藥品 |
(1) 由冰箱取出之藥品,應在充分回溫之後,才能開罐。 (2) 使用極度頻繁的藥品,應 分裝 後凍藏 (aliquot),每次取用一個分裝,可不用等待回溫,但用後也不再收回凍藏。 |
■ 警告符號 |
c. 藥品純度 |
一般依純度及用途分為數級,如 和光 分為:化學用、一級、特級,Merck 藥品則分為︰合成 (for synthesis)、特純 (extra pure)、生化用 (for biochemistry)、試藥 (pro analysis 或 GR)。 各種等級的藥品,應當用在適當的實驗,否則不是浪費,就是因藥品純度不佳而致實驗失敗。 |
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d. 注意添加物 |
許多商品所供應的酵素,是保存在 硫酸銨 懸浮液中,可較為安定;但使用前要先透析,除去硫酸銨;否則在硫酸銨下分析活性,會造成誤判。 也要注意酵素的來源,及其所含的鹽類,會不會影響你的實驗。 |
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a. 個人藥品 |
所有藥品一定要加標籤 (圖 1.1),註明 日期、藥品名稱、使用人姓名 等,藥品名稱勿用暗號,以免日後連自己都忘掉是何試劑。 試劑勿配製過量,因大多數的藥品在久貯後均不穩定;要檢查緩衝液內有無長霉! 每個人的藥品應集中一處固定收存,切忌到處存放。 |
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b. 立刻清洗 |
玻璃用具 (如試管、燒杯、三角瓶等) 使用後,請儘量在當日清洗掉,這是最省時省力的。用清潔液浸泡時,不要用洗衣的肥皂粉,要使用液態的洗潔精,並應在兩日內清洗掉,因為可以說是『越泡越髒』! |
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c. 做完實驗後 |
一定要把所用過的 儀器、實驗桌、用具 等整理乾淨,回復原狀。 離開前要從頭回顧,檢查所有使用過的儀器或實驗桌,也許會發現重要的藥品或樣本忘了收起來,或貴重的儀器忘了關機。 |
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農化二館 214 酵素化學實驗室 |
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2 蛋白質抽取 |
3 色層分析法 |
4 其它純化方法 |
5 純化策略 |
[Pur1]
本網頁最近修訂日期: 2002/07/26