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生物技術方法卷一	▼ 生物技術核心實驗 BCT	回首頁
	Biotechnology Core Techniques

	目錄 Contents and Credits


Contents
	數字為本書紙本頁碼
Contents	目錄 Detail Contents ． Credits			v
Prefaces	序言校長序．宋序．蔡序			ix
Acknowledgement	誌謝感謝所有的教師、助教與同學			xii
Course Introduction	概說本課程的快速導覽			xiii

Chap 0	本核心實驗的主角 - GUS 基因		台灣大學園藝系黃鵬林	1
Chap 1	第一章基本操作技術	詳細目錄	台灣大學農化系王愛玉	3
Chap 2	第二章表現質體的建立	詳細目錄	台灣大學農化系王愛玉	19
Chap 3	第三章北方雜合分析	詳細目錄	台灣大學植病系劉瑞芬	43
Chap 4	第四章表現蛋白質之純化與分析	詳細目錄	台灣大學農化系莊榮輝	67

Appendix	附錄預定課程表實驗器材表撰寫實驗報告		Schedule ． Utilities ． Report	89
Index	索引			93	▲

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各章詳細目錄


	Detail
	數字為本書紙本頁碼
Chap 0	本核心實驗的主角 - GUS 基因 GUS Gene - The Focus of This Course		1

Chap 1	第一章基本操作技術 Basic Laboratory Techniques		3	回目錄
	1.0	實驗室安全 Lab Safety	3
	1.1	微量吸管之使用 Autopipetting	5
	1.1.1	認識 Gilson Pipetman P	5
	1.1.2	基本使用方法	5
	1.1.3	使用注意事項	8
	1.1.4	練習使用微量吸管	8
	1.1.5	檢測微量吸管的準確度	8
	1.2	分光光度計之使用 Spectrophotometry	9
	1.2.1	日立 U-1100 光度計使用法	9
	1.2.1.1	吸光度測定方法	9
	1.2.1.2	使用注意事項	9
	1.2.2	測定溶液之吸光值	10
	1.3	細菌培養方法 Bacterial Culture Technique	11
	1.3.1	單一菌落之分離	11
	1.3.2	過夜菌液之培養	12
	1.3.3	E. coli JM109 之生長曲線	12
	1.4	DNA 之限制脢分析 Restriction Digestion of DNA	14
	1.4.1	DNA 之限制脢切割	14
	1.4.2	洋菜膠體電泳	16

Chap 2	第二章表現質體的建立 Construction of Expression Plasmid		19	回目錄
	2.1	質體 DNA 的小量分離法 Mini-Prep for Plasmid DNA	21
	2.2	質體 DNA 之限制脢分析 Restriction Analysis of Plasmid DNA	23
	2.2.1	質體 DNA 之檢定	23
	2.2.2	大量DNA之限制脢作用	24
	2.3	DNA 片段的分離與純化 Isolation of DNA Fragments	26
	2.3.1	DEAE membrane 吸附法	28
	2.3.1	Silica gel 吸附法	14
	2.4	DNA 之定量 Quantitative Analysis of DNA	30
	2.5	接合反應 DNA Ligation	31
	2.6	質體之轉形 Transformation by Plasmid DNA	32
	2.6.1	氯化鈣法	32
	2.6.2	電穿孔法	34
	2.7	重組質體的檢定 Analysis of Recombinant Plasmid	36
	2.7.1	Colony hybridization	36
	2.7.2	Histochemical detection	38
	2.7.3	質體快速檢定法	39
	2.7.4	重組質體之檢定	39
	2.7.4.1	重組質體之限制脢分析	39
	2.7.4.2	Southern 轉印分析	40

Chap 3	第三章北方雜合分析 Northern Hybridization		43	回目錄
	3.1	RNA 製備 RNA Preparation	43
	3.1.1	自大腸桿菌抽取 RNA	45
	3.1.2	胞外轉錄反應	47
	3.1.2.1	質體 DNA 酵解反應與洋菜膠體電泳分析	47
	3.1.2.2	以 phenol/chloroform 進行 DNA 萃取	49
	3.1.2.3	胞外轉錄反應	50
	3.2	以 DIG 標定核酸探針 Probe Labeling by DIG	53
	3.2.1	Random priming	53
	3.2.2	PCR	55
	3.3	變性膠體電泳與北方雜合分析 Denaturing Gel & Northern Analysis	57
	3.3.1	變性膠體電泳	57
	3.3.1.1	清理電泳槽	57
	3.3.1.2	甲醛洋菜膠體電泳	58
	3.3.1.3	以毛細管轉移方式進行北方轉印實驗	59
	3.3.2	北方雜合反應	61
	3.3.3	以酵素連結免疫反應與鹼性去磷酸脢呈色反應偵測雜合訊息	63

Chap 4	第四章表現蛋白質之純化與分析 Purification and Identification of Protein		67	回目錄
	4.1	蛋白質純化方法 Protein Purification	67
	4.1.1	蛋白質抽取 Protein extraction	71
	4.1.2	膠体過濾法 Gel filtration	74
	4.1.3	離子交換法 Ion exchange	75
	4.1.4	親和層析法 Affinity chromatography	76
	4.2	蛋白質檢定方法 Protein Analysis	76
	4.2.1	蛋白質定量分析 Protein determination	71
	4.2.2	酵素活性分析法 Enzyme activity assay	78
	4.2.3	膠体電泳法 PAGE	79
	4.2.4	蛋白質轉印法 Protein blotting	84
	4.2.5	免疫染色法 Immunostaining	86

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	Credits







	版權及工作人員	Copyrights and Credits


	生物技術方法	Methods in Biotechnology
	卷一	Volume 1
	生物技術核心實驗	Biotechnology Core Techniques

	保留版權	Copyright 2001
	請勿翻印	All Rights Reserved
	二○○一

	國立台灣大學	National Taiwan University
	生物技術研究中心	Center for Biotechnology
	二○○一年一月	January 2001

	總編輯：蔡嘉寅	Editor in Chief: CY Tsai
	卷一主編：莊榮輝	Editor, Vol 1: RH Juang
	卷一作者：黃鵬林王愛玉劉瑞芬莊榮輝	Authors, Vol 1: PL Huang, AY Wang, RF Liou, RH Juang
	助理編輯：吳建興張慈映黃瀅如	Assistants: JS Wu, TY Chang, YJ Huang

	印刷設計：高狄有限公司 (02) 2709-5039	Design & Printing: Gaudi (02) 2709-5039

	中心連絡方式：(02) 2363-0231 ex 3740	Center for Biotechnology, National Taiwan University
	生技中心網頁： www.cbt.ntu.edu.tw	1, Roosevelt Rd. Section 4, Taipei, Taiwan 106
	莊榮輝網頁：140.112.78.220/~juang/index.htm	Web site: www.cbt.ntu.edu.tw or 140.112.78.220/

	ISBN: 957-97286-8-2

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■ 最近修訂日期︰ 2004/03/23