蛋白質交互作用

	暑期生物技術課程
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	蛋白質交互作用

上課期間	2005 年 07/18~07/29 每週一至週五	錄取名單
任課教師	林榮耀	10 名
學分數	2 (講習 + 實習共 50 小時)
講習實習	實習課程 (含原理講解)
學生人數	20
校外業界	外校選修：可業界選修：可	收費標準
資格限制	(未定)
課程大綱	(I) 酵母菌双雜合系統 (yeast two-hybrid system)：本實驗擬以酵母菌真核系統為工具，在活體內 (in vivo) 環境中研究蛋白質間的交互作用。課程中係以 p53 及 SV40 large T antigen 具專一性交互作用的一組蛋白質為研究對象，搭配不具交互作用的控制組，提供學生們有系統的實驗流程，期望未來學生們能以此工具為基礎，發現新的蛋白質功能性互動關係。
課程大綱	(II) GST pull-down system：利用試管內 (in vitro) 實驗模式，以雞母珠毒蛋白質 A-鏈 (His-tagged ABRA) 與核醣體蛋白質 P0, L9 (GST-P0, GST-L9) 為研究對象。將 His-tagged ABRA 與 GST-P0 or GST-L9 混合後，利用親和性球珠 (GSH agarose-4B beads) 將蛋白質複合體沉澱下來。最後利用西方墨點分析蛋白質交互作用。

上課地點	台大醫學院基礎醫學大樓 901 教室 (講習) / 基醫大樓四西學生實習室 (實習)
報名表	下載

日期	時間	主題	授課老師
07/18 一	13:00-14:30	○ Preparation of buffer and culture medium	林榮耀
07/18 一	14:30-18:00	△ 實驗操作
07/19 二	13:00-14:30	○ Cultivation and examination of yeast cells
07/19 二	14:30-18:00	△ 實驗操作
07/20 三	13:00-14:30	○ Yeast co-transformation with plasmids encoding p53 and SV40 large T antigen
07/20 三	14:30-18:00	△ 實驗操作
07/21 四	13:00-14:30	○ Yeast mating assay
07/21 四	14:30-18:00	△ 實驗操作
07/22 五	13:00-14:30	○ Colony-lift filter assay
07/22 五	14:30-18:00	△ 實驗操作
07/25 一	13:00-14:30	○ Quantitative analysis for protein interactions
07/25 一	14:30-18:00	△ 實驗操作
07/26 二	13:00-14:30	○ Expression of recombinant proteins in E. coli cells
07/26 二	14:30-18:00	△ 實驗操作
07/27 三	13:00-14:30	○ Purification of recombinant proteins with tags (His-ABRA, GST-P0 and GST-L9)
07/27 三	14:30-18:00	△ 實驗操作
07/28 四	13:00-14:30	○ GST pull-down procedure
07/28 四	14:30-18:00	△ 實驗操作
07/29 五	13:00-14:30	○ Western-blotting analysis using anti-His or anti-GST antibody
07/29 五	14:30-18:00	△ 實驗操作